Научно-практическая конференция и школа с международным участием, посвященная 90-летию со дня рождения академика В.В.Фролькиса

ТРИПЕПТИД РЕГУЛИРУЕТ ЭКСПРЕССИЮ МАРКЕРОВ КЛЕТОЧНОГО СТАРЕНИЯ В ПОЧКАХ

2014

Ведущими маркерами клеточного старения являются белки – регуляторы клеточного цикла р16, р21 и р53. Повышение экспрессии этих молекул свидетельствует о замедлении процессов клеточного обновления в ткани. Короткие пептиды являются эффективным средством лечения различной возрастной патологии, в том числе и почечной. Молекулярный механизм их действия связан с эпигенетической регуляцией экспрессии генов.

Целью исследования явилось изучение влияния пептида Т-31 (Ala-Glu-Asp, AED) на экспрессию маркеров клеточного старения в культурах клеток почек.

Методика. Исследование проводили методом конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии в диссоциированных культурах клеток почек крыс линии Wistar. 3 пассаж расценивали как «молодые» культуры клеток, 14 пассаж – как «старые». Культуры были разделены на 2 группы: контрольную (физиологический раствор) и экспериментальную (пептид AED в концентрации 20 нг/мл). Клетки фиксировали 4% параформальдегидом и проводили пермеабилизацию 0,1% Triton X-100. Иммунофлуоресцентное окрашивание проводили с антителами к маркерам р16 (Abcam, 1:200), р21 (Novocastra, 1:100), р53 (Novocastra, 1:50). Инкубацию со вторичными антителами, конъюгированными с флуорохромом Alexa Fluor 488  (1:1000, Abcam), проводили при комнатной температуре в темноте. Окрашенные культуры фотографировали и анализировали полученные изображения по показателю площади экспрессии в программе Videotest-Morphology 5.2.

Результаты. Пептид AED снижал площадь экспрессии протеина р16 в «молодых» и «старых» культурах клеток соответственно в 1,7 раза (с 1,27±0,04% до 0,76±0,03%) и 2,4 раза (с 2,03±0,05% до 0,85±0,04%) по сравнению с контролем (p<0,05). Пептид AED уменьшал площадь экспрессии ингибитора циклин-зависимых киназ р21 в «старых» культурах клеток в 2,4 раза (с 2,54±0,06% до 1,05±0,03%) по сравнению с контролем (p<0,05), но не влиял на этот показатель в «молодых» культурах клеток почек. Под действием пептида AED наблюдалось снижение экспрессии проапоптотического белка р53 в «молодых» и «старых « культурах клеток соответственно в 2,5 раза (с 0,67±0,03% до 0,27±0,02%) и в 1,8 раза (с 1,83±0,05% до 0,99±0,04%) по сравнению с контролем (p<0,05).

Выводы. При старении культур клеток почек наблюдается повышение экспрессии белков р16, р21 и р53 – маркеров клеточной сенисцентности. При этом пептид AED снижает экспрессию этих белков, что в большей степени было выражено в «старых» культурах клеток почек. Таким образом, пептид AED обладает нефропротекторными свойствами, замедляя проявления клеточно старения в ткани почек животных.