Научно-практическая конференция и школа с международным участием, посвященная 90-летию со дня рождения академика В.В.Фролькиса

ДИНАМИКА ЭКСПРЕССИИ КОННЕКСИНОВ ПРИ СТАРЕНИИ КУЛЬТУР КЛЕТОК СОСУДОВ

2013

Цель. Одной из наиболее распространенных видов сердечно-сосудистой патологии является атеросклероз, лежащий в основе ишемической болезни сердца и приводящий к тяжелым осложнениям в виде инфаркта миокарда и хронической сердечной недостаточности. Одними из ключевых сигнальных молекул сосудистой стенки являются коннексины, мутации в генах которых могут лежать в основе сердечно-сосудистой патологии. Целью исследования явилось изучение возрастной динамики экспрессии коннексинов Сх37 и Сх40.

Материалы и методы. Материал аорты без патологических изменений был получен от эмбриона человека (21 неделя гестации) в НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН. Путем ферментативной диссоциации из материала аорты была получена первичная культура ткани эндотелия. 3 пассаж расценивали как «молодые» культуры», 14 пассаж как «старые» культуры. Клетки культивировали в стандартных условиях (5% СО2, 87,5% M199, 10% FBS, 1,5% НЕРЕS, 1% PES и L-глутамин). Для иммуноцитихимического исследования использовали первичные моноклональные антитела к маркерам Сх37 (1:20, Abgent), Сх40 (1:100, Abcam), и вторичные антитела – биотинилированные антимышиные иммуноглобулины. Оценку результатов иммуноцитохимического окрашивания проводили морфометрическим методом на микроскопе «Nikon Eclipse» E400 с помощью цифровой камеры «Nikon» DXM1200 и программного обеспечения «Vidеotest Morphology 5.2».

Результаты. При анализе микроскопических изображений клеток эндотелия было установлено, что площадь экспрессии Cx37 в «молодых» культурах составила 9,14±1,43%, Сх40 - 6,44±1,62%. Было выявлено достоверное снижение экспрессии коннексинов при старении клеток эндотелиоцитов сосудов – синтез Cx37 снижался в 2,4 раза до 3,76±1,81%  и Cx40 – в 2,6 до 2,49±1,05 (р<0,05).

Выводы. Таким образом, было выявлено достоверное снижение синтеза коннексинов при старении культур, что является возможным патогенетическим звеном нарушения функционирования проводящей системы сердца.